全基因组范围基因敲除gRNA文库（GeCKO v2.0）

金斯瑞供应发明专利人才引进于Broad做实验所张峰做验室的，能建立Human和Mouse受损内部核染色体组规模CRISPR敲除的gRNA文库（GeCKO ），会在Human或Mouse受损内部核中高速造成性能损坏的遗传染色体遗传变异体但会选择所能够的表型。运行GeCKO文库会在人或小鼠的染色体组内敲除每表述染色体及miRNA等非表述的染色体。GeCKO 文库能够业主在有差异 的的条件下签定每受损内部核性能须得的染色体，选择社么染色体的损坏会使癌受损内部核具有着抗药理作用。 GeCKO 文库早已被常见采采用原代的人或小鼠受损内部核，干受损内部核，癌受损内部核及各个保持稳定受损内部核系。 GeCKO v2.0充当升级成成版的GeCKO文库，参加非靶点gRNA充当差表，并且采用转导的慢艾滋新冠电脑病毒平台也同步操作做了升级成成，以便更高的效的生物富集艾滋新冠电脑病毒和完善艾滋新冠电脑病毒在原代受损内部核的转染错误率。 GeCKO v2.0文库造成每人类dna设计的概念了6条gRNA编码序列，但成了减小事件转染和选择任务量的阻力将GeCKO v2.0文库拆成两根文库，文库A和文库B。每文库涉及到造成每人类dna的3个gRNA，、1,000个非靶点的比对性gRNA。A文库还涉及到造成miRNA的gRNA（每miRNA有4个gRNA）。成了有效确保造成每人类dna的gRNA的删改表达爱，能否同一时间选择A文库和B文库比调后应用；但要是上皮细胞产品的样品和事件mtk量筛学习能力不多，都可以能否仅应用文库A做选择。

更多GeCKO文库设计、构建信息，请参考张峰实验室发表的文献：Sanjana N.E., Shalem O., Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug;11(8):783-4. doi: 10.1038/nmeth.3047.

文库信息

金斯瑞GeCKO v2.0文库交付形式和使用方法

GeCKO v2.0文库文件企业每个个gRNA都被克隆进SEO优化的慢木马hiv病毒平台，与外挂体人体组织共转染293体人体组织后可型成高滴度的木马hiv病毒, 决定gRNA队列可在意义体人体组织中进行效率转录。 完整病毒是什么包装方式的GeCKO v2.0文库应与基本原则人体神经元来现在开始较低的MOI来现在开始转染，以抓实流入单一个人体神经元的gRNA规模不低于个。在完整转染后，现在开始建立工作中的时候，应来现在开始每轮NGS深浅测序，风险评估人体神经元池中gRNA的理解症状。在建立完结后再来现在开始第三轮NGS深浅测序，并对数计算据来现在开始浅析, 确定好建立操作过程中不见或生物富集的gRNA回文序列。 学习学术论文：

GeCKO文库交付规格

• 文库（转染级）以25μg为一个单位量。100μg 及200μg文库分别是以4 x 25μg或者8 x 25μg形式交付。
• 提供项目报告及二代测序验证的统计摘要及COA 文件，如您需要，还可提供完整可用的NGS原始数据。

CRISPR 转录激活（SAM）gRNA文库

将激光切可溶性不足的dCas9核蛋白质和转录刺激部件实施整合，同一时间配用靶向治疗药物药物DNA上中下游干预行政区的gRNA队列建立的转录刺激pp物能招商精准靶向治疗药物药物DNA上中下游转录刺激行政区并效果刺激DNA的表述。建设方案靶向治疗药物药物全DNA区域的gRNA文库整合dCas9和转录刺激核蛋白质，协调上浮全DNA表述水准，能够 被app于mtk量、最快的的功能得到型选择。

CRISPR转录激活gRNA文库的使用

做细菌木箱的SAM文库应与依据内部核做较低的MOI做转染，以保证 进来独立内部核的gRNA用量不低于一个。在做转染后，对其实现筛分工做前几天，应做第一轮NGS深入测序，测试内部核池中gRNA的展现原因。在筛分开始和结束后再做第二步轮NGS深入测序，并多数据做了解, 来确定筛分心情压抑的时候中找不到或生物富集的gRNA回文序列。

更多SAM文库设计和构建的完整细节，请参见: Konermann S*, Brigham MD*, Trevino AE, Joung J, Abudayyeh OO, Barcena C, Hsu PD, Habib N, Gootenberg JS, Nishimasu H, Nureki O & Zhang F. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, doi:10.1038/nature14136.

转录激活 (SAM) gRNA文库信息

Human转录激活 (SAM) gRNA文库

• Human转录激活 (SAM) gRNA文库，靶向Human细胞全基因组中23,430个基因，包含70,290 gRNA序列，每3条sgRNA序列即靶向1个基因。
• Human转录激活 (SAM) gRNA文库克隆至 pLenti sgRNA(MS2)_zeo或载体。
• 另随文库附上 金年会:lenti dCas9-VP64_Blast及 lenti MS2-P65-HSF1_Hygro两个辅助质粒。

Mouse转录激活 (SAM) gRNA文库

• Mouse转录激活 (SAM) gRNA文库包含 ；靶向Mouse细胞全基因组中23,439个基因，每3条sgRNA序列即靶向1个编码亚型，同时包含491条非靶向gRNA作为对照。
• Mouse转录激活 (SAM) gRNA文库克隆至载体。
• 另随文库附上 plenti dCas9-VP64_Blast及 plenti MS2-P65-HSF1_Hygro两个辅助质粒

转录激活(SAM) gRNA文库规格

Pathway-focused gRNA文库

Pathway-focused gRNA文库是靶点选择某一径路的自然器具。选用依靠性药物什么是什么是基因组数据显示交互数据显示库（Drug Gene Interaction Database）确保的什么是什么是基因组靶点，来设汁好的文库都可以于径路或的疾病涉及到什么是什么是基因组的选择。因此gRNA回文序列由Broad深入分析所先要来设汁和查证，并可定制网站化克隆至慢艾滋病毒承载中。

• Pathway	Gene #	gRNA #
  金年会:ABC Transporter	100	298
  金年会:Adult Stem Cells	58	174
  Angiogenesis	92	276
  金年会:Apoptosis	68	204
  cAMP & calcium Signaling Pathway	91	271
  Cell Cycle	84	252
  金年会:Cytochrome P450	57	171
  金年会:Drug Resistance	348	1044
  GPCR	280	840
  Hormone Activity	108	324
  金年会:Ion Channels (Potassium)	67	201
  金年会:Tumor Metastasis	60	180
  金年会:Nuclear Hormone Receptors	117	351
  金年会:Oncogenes	289	867
  金年会:Tumor Suppressor	720	2155
  WNT Pathway	92	276

• Pathway	Gene #	gRNA #
  金年会:Acute myeloid leukemia	45	135
  金年会:Adipogenesis	126	378
  金年会:Alzheimer's disease	94	281
  金年会:B cell receptor signaling pathway	58	174
  Bladder cancer	37	111
  金年会:Cardiovascular Disease	91	273
  Chemokine signaling pathway	134	402
  Chronic myeloid leukemia	57	171
  金年会:Colorectal cancer	54	162
  Diabetes	44	132
  Drug Metabolism	34	102
  金年会:Drug transporters	84	252
  ES Cell Differentiation	334	1002
  金年会:Extracellular Matrix & Adhesion	84	252
  金年会:Growth Factor	161	483
  Histone Modification	259	776