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GenCRISPR™ gRNA/Cas9 质粒整合
CRISPR/Cas9 质粒服务，助力sgRNA表达和基因编辑
金斯瑞供给的CRISPR材料由来于张锋實驗室，所供给的CRISPR物品和服务管理能够 法国 Broad 设计所商标授权经营。分为：- 已经被MIT设计并验证的sgRNA序列
- 包含all-in-one和Dual 多种类型的载体选择，并可根据需要筛选抗性
- 经MIT验证的空载类型
- 多种Cas9 类型：包含eSpCas9，SpCas9，SpCas9 Nickase，SaCas9和SAM
服务优势
-
特异性sgRNA序列
sgRNA序列由MIT验证 -
野生型SpCas9和SAM的人或小鼠的sgRNA序列库 -
及时交付
20,000+条sgRNA隔天交付* -
专业设计工具
可设计多达12个物种的gRNA序列
CRISPR gRNA数据库
金斯瑞供给超20,000 种含gRNA字段的plentiCRISPRV2质粒，所有sgRNA字段已然被MIT证实。在数值之中，您可进行网络搜索染色体称呼，染色体标志logo或ID来寻找有关的gRNA。| 服务 | 表达系统 | 筛选标记 | |
|---|---|---|---|
| GenCRISPR质粒库 | Lentiviral | Amp, Puro |
一、定制质粒类型
选择Cas9业务类型，私人定制质粒主要包括相应些：-
增强CRISPR/SpCas9质粒 - eSpCas9 New
特男人强化SpCas9 (Enhanced specificity SpCas9, eSpCas9)，指的是 SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A)，是经途MIT张锋工作室特男人变革的质粒(Slaymaker et al. 2016).eSpCas9会降底脱靶的高质量率，比自然而然SpCas9脱靶的高质量率降底10倍之多，同样可构建表观遗传高质量编。 Cas9表观遗传组复制粘贴根据于DNA双链的分离处理。sgRNA和非靶点治疗DNA编码序列的不符合将影响非特男人融合和分裂主义。要想提高了表观遗传组复制粘贴的特男人，科学考古学家开发设计了甲基化为K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶链挖管内中和这种带正正电荷的残基，既还行抑制非靶融合，也还行多种多样靶点治疗融合，相应的操作所需更从严的Watson-Crick碱基匹配。服务 表达系统 筛选标记 eSpCas9质粒 Plasmid
LentiviralPuro
GFP获取报价 -
SpCas9质粒 Hot
Cas9内切酶是染色体修改的研究分析标准化。当与单导RNA (single guide RNA,sgRNA)编码序列相结合时，这样的酶在染色体组中呈现位点特女性朋友双链折断(double strand breaks, DSBs)。- SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达，也可以在dual载体中单独表达。
- 优选的靶上SpCas9 PAM序列为NGG。
- SpCas9还包含NGA序列的目标亲和力。
服务 表达系统 筛选标记 SpCas9 Plasmids Plasmid
Lentiviral AAVAmp
Amp, Puro
Amp, Neo
Amp, GFP获取报价 -
SpCas9 Nickase质粒
SpCas9 nickase (Cas9n D10A)涵盖另一个突变的，各种与SpCas9切时养成DSB， SpCas9 nickase在切字段时养成单链矛盾。 SpCas9 nickase切后，两相对性的gRNA字段能合理有效匹配，可能种技术能减少没有需要要的插入图。服务 表达系统 筛选标记 SpCas9 Nickase Plasmids Plasmid
LentiviralAmp
Amp, Puro
Amp, GFP获取报价 -
SaCas9质粒
蓝色萄葡球菌Cas9同源体(Staphylococcus aureus Cas9 orthologue,SaCas9)是腺相关的艾滋病毒(adeno-associated virus (AAV AAV)软件应用的佳内切酶。SaCas9比SpCas9最少短1kb，这不得了在AAV制造时更加的利索。AAV承载较低的免役原性，使SaCas9比较比较适合于人体内编辑器的。- 优选的靶SaCas9 PAM序列为NNGRRT。
- SaCas9 对NNGRRN也有很高的亲和性。
服务 表达系统 筛选标记 SaCas9 plasmids AAV Amp 获取报价 -
转录激活（Transcription Activation, SAM)质粒
CRISPR/Cas9协同工作更改密码物质(SAM)设备的已被设计的代替更改密码中上游对象的转录。SAM设备的选择四种不一样的更改密码分子，VP64、P65和HSF1，植物的根被組裝到催化剂的作用降解的Cas9(dead Cas9,dCas9)塑料物上驱动包转录。- SAM复合物由三个组分组成:一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
- SAM系统能够激活编码和非编码的元素。
- 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列，请前往gRNA数据库。
二、空载服务
为满足了您的科技需用，金斯瑞展示变压器空载服务保障，的质粒载体编码编码序列已是由MIT验证通过。那些的质粒载体包函一款17bp-1.8kb的可表述拼接体，以用于设计的sgRNA编码编码序列，您可依照需用对其进行降重。SpCas9 载体
Cas9内切酶源头于II型CRISPR控制软件。发炎性链球菌(SpCas9)是第十二个为喂乳辅乳动物界表观遗传组我们Cas9酶。当与gRNA 字段融合后,等等酶就能够在既定位点积极进取行表观遗传组双链断了。因为它的简洁性,特异形以其有效性，CRISPR / Cas9控制软件在表观遗传组我们中广用到，金斯瑞保证Broad深入分析所核实的 WT SpCas9可于喂乳辅乳动物界表观遗传组我们。 WT SpCas9的交付使用媒介有两大类主要形式， All-in-one 和Dual 品类，可于非宏类细菌样本有哪些性，慢宏类细菌样本有哪些型lenti-viral ，以其腺重要性宏类细菌样本有哪些(AAV)的转染。之中，慢宏类细菌样本有哪些品类兼容第十一代和第3代慢宏类细菌样本有哪些包装袋质粒。SpCas9 Nickase载体
尽管CRISPR / Cas9方法与任何DNA遗传添加方法相比之下是较为清晰的,其实脱靶始终有的是个关键问题。为了能够提升特男人,有效家们对Cas9核酸内切酶能够 了获取。WT Cas9有好几个离子液体域, RuvC 和 HNH,在哪些域中能够 离子液体残基变化(专门是RuvC D10A和HNH H840A)，组成单链收窄与双链断开(Ran et al, 2013)。哪些Nickase Cas9酶,或Cas9n,由gRNA 正确引导至靶DNA遗传组DNA的另个端。生殖生殖细胞将能够 HDR重要复原哪些SSBs而也不是NHEJ。能够 HDR体制能能将影响脱靶效用。金斯瑞为您带来Broad分析所认可的Nickase Cas9电子助力您在喂母乳食草动物生殖生殖细胞里的DNA遗传添加。
SaCas9 载体
从金黄色葡萄球菌或SaCas9中提取的Cas9同源物与SpCas9具有相似的效率；然而，SaCas9长度比SpCas9大约小于1kb。SaCas9的主要优势是腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)包装：AAV的载体大小约为4.5kb，因此将SpCas9与AAV包装在一起可能具有挑战性(Ran et al.， 2015)。相对较小的SaCas9利用AAV载体进行CRISPR基因编辑成为可能。考虑到这一结构的免疫原性较低，因此SaCas9更适合于体内编辑应用，如用于治疗。
Transcription Activation (SAM) 载体
CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator (SAM) )有的是种血清质塑料物，可增加内源性dna组(一一dna组，或指定血细胞行同时有几瓦10个dna组)的转录。SAM利用率Cas9核酸酶的特情人和付用性，可以通过gRNA将Cas9核酸酶产品定位于内源性dna组组的特产品定位点。Genscript与Broad Institute*签署合同了经营许可证合同书，供给通过确认的SAM gRNA队列，可对应猿类dna组组中的许多编码查询行政区域，为同许多许多动物群供给手机免费的SAM gRNA的设计保障。SAM复合体由三个组件组成
- 剪切失活的dCas9-VP64融合蛋白：使用dCas9确保内源性基因组中没有链断裂；VP64是一个转录激活域，与p65和HSF1协同作用，增强转录。
- 一个包含两个MS2 RNA适配体的sgRNA：sgRNA的设计目标应该是转录起始位点上游的前200个bp，以便针对SAM复合物进行理想的转录激活。虽然sgRNA通常与Cas9结合，但需要MS2 RNA适配体才能使SAM复合体的第三个成员与Cas9-sgRNA复合物结合。
- MS2-P65-HSF1激活辅助蛋白：包含两个转录激活域P65和HSF1，与VP64协同作用，强力激活下游编码区域的转录。MS2结构域允许其辅助蛋白与sgRNA-dCas9复合物结合。
CRISPR 载体规格
| 服务 | 载体 | Cas9/gRNA 表达系统 | 交付类型 | 载体类型 | 筛选标记 |
|---|---|---|---|---|---|
| eSpCas9 Plasmids | eSpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
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| eSpCas9 Plasmids | eSpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
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| eSpCas9 Plasmids | eSpCas9 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
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| SpCas9 Plasmids SpCas9 Nickase Plasmids |
gRNA Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR PuroR |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR EGFP |
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| SpCas9 Plasmids | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR | |
| SpCas9 Plasmids | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR NeoR |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR | |
| SpCas9 Plasmids | gRNA Only | AAV | Dual Vector | AmpR EGFP |
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| SpCas9 Plasmids | SpCas9 Only | AAV | Dual Vector | AmpR | |
| SpCas9 Nickase Plasmids | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR | |
| SpCas9 Nickase Plasmids | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
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| SpCas9 Nickase Plasmids | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
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| SpCas9 Nickase Plasmids | SpCas9 Nickase Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
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| SaCas9 Plasmids | SaCas9 & gRNA | AAV | All-in-one Vector | AmpR | |
| Transcription Activation (SAM) | gRNA Only | Plasmid | SAM Multi Vector | AmpR | |
| Transcription Activation (SAM) | gRNA Only | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR ZeoR BeloR |
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| Transcription Activation (SAM) | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR BlastR BleoR |
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| Transcription Activation (SAM) | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
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| Transcription Activation (SAM) | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR HygroR BleoR |
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| Transcription Activation (SAM) | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
- CRISPR手册： CRISPR/Cas9 基因编辑的综合性指南
- CRISPR RNP使用指南：如何在基因编辑中使用CRISPR RNP
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