质粒制备QC项目详解
金斯瑞质粒化学合成品类服務服務质量正常提拱7项这QC检验，重要途径为顾客提拱高品服務质量，高规格的质粒。通常QC创业項目以及要求性内切酶酶切阐述，残余RNA检验，残余DNA检验，内毒物阐述，免費最终目标表观遗传队列测序，与此同时金斯瑞还提拱正确内毒物份量核查，RNA削除等扣减QC服務服務质量创业項目，轻松的取舍需要满足顾客的定制化化使用需求。| QC 项目 | 参考状态 | 测定方法 |
|---|---|---|
| 超螺旋程度 | 高级别质粒≥ 90% | 琼脂糖凝胶电泳密度测定 |
| 内毒素测定 | 高级别质粒≤ 0.005 EU/µg DNA | TAL 分析 |
| 插入序列全长测序 | 序列准确 | Sanger 测序 |
| 生物负载测定 | 48小时无生长 | 生物负载实验 |
| 限制性内切酶分析 | 与预期大小一致 | 酶切后凝胶电泳分析 |
| 外观 | 透明，无明显颗粒 | 视觉观测 |
| A260/280 | 1.8-2.0 | Nanodrop UV值测定 |
| 残留RNA | 凝胶电泳不可见 | 琼脂糖凝胶电泳密度扫描 |
| 基因组DNA污染 | 基因组DNA＜质粒条带的15% | GIS灰度分析法 |
| 全长测序服务 | 序列准确 | Sanger 测序 |
| Animal free RNA去除 | 无特定标准值 | / |
| 浓度 | 干粉、液体 （默认1mg/mL*，可根据需求调整浓度） |
UV测定 |
* 不同的测试仪器的盐浓度读数可能会在-5%～+15%区间内改变。
常规问题解答
1： 什么是内毒素，为什么我们要关注质粒中的内毒素残留量？金斯瑞提供了哪些不同的选择？
答：内毒素是存在于细菌如大肠杆菌外膜中的脂多糖或脂聚糖，可以固定膜的完整性和保护细菌本身免受某些压力，维持细菌结构的稳定性。但若制备的质粒中内毒素残留过高，会使其转染细胞的效率降低，同时还可能造成动物或人的免疫反应进而影响基因免疫疗法的实验结果。
2： 什么是“控制内毒素流程”和“内毒素去除” ？
答： “控制内毒素流程”是指严格控制在整个实验过程中使用的试剂，材料使其不含内毒素，但不保证细菌裂解过程中细菌本身释放的内毒素。“内毒素去除”是指质粒制备过程中的一个独立步骤，该步骤使用化学试剂去除质粒制备过程中产生的内毒素。
3： 金斯瑞制备的质粒其内毒素残留量是多少？
答： 金斯瑞提供3种不同的质粒制备服务，不同服务内毒素含量水平也不相同。分子生物学质粒制备未使用内毒素控制流程，但严格控制质粒制备操作手法，能尽可能的减少内毒素的产生。转染级质粒制备可确保内毒素水平≤0.01 EU/µg，代表了当今市场上质粒制备较严格的内毒素质量标准。我们的高通量质粒制备服务使用内毒素控制流程，能确保制备的质粒内毒素水平<0.1 EU/µg，满足细胞转染实验要求。
4： 什么是“Animal free 培养基”？什么是“Animal free 质粒制备流程”？
答： Animal free 培养基是不含任何动物来源成份的培养基。金斯瑞质粒制备服务均使用Animal free 培养基，同时金斯瑞制在质粒制备中不使牛胰腺 RNase而是使用重组RNase，能确保制备的质粒中没有牛血清白蛋白成分残留。使用Animal free质粒制备流程制备质粒对避免临床应用和动物研究的安全风险至关重要。
5： 为什么质粒的超螺旋占比很重要？
答：多项研究表明，质粒中超螺旋状态的占比是众多下游实验成功的关键。例如，超螺旋可以强烈影响细胞转染效率和影响DNA治疗中副作用的产生概率。超螺旋占比已被认定为预测质粒性能的一项重要指标。
质粒服务类型
询价与订购
- 为了能够准确高效地为您提供报价，请您先下载金年会:质粒制备服务询价表，然后将填写完整的询价表发送至金年会:gene@gengcript.com.cn，我们将第一时间为您提供报价。
- 您也可以使用金斯瑞的在线订购系统，自主极速完成下单。
